适于双向电泳分析的银杏叶绿体蛋白质提取方法

梁霏霏; 施大伟; 何梅; 徐鸣

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适于双向电泳分析的银杏叶绿体蛋白质提取方法

首发时间：2016-01-12

梁霏霏 ¹
梁霏霏（1994-），女，本科生，生物与环境学院，生物科学专业。
施大伟 ¹
施大伟，博士，讲师，主要从事植物生理与细胞生物学研究
何梅 ¹ 徐鸣 ¹

1、南京林业大学生物与环境学院，南京210037

摘要：【目的】研制银杏等木本植物的叶绿体蛋白质的有效提取方法。【方法】参照并改进Pflieger和Rossier的方法用于叶绿体的分离，并利用透射电镜进行观察和测定叶绿体的完整率。分别取由10g银杏叶片提取的完整叶绿体颗粒，用TCA-丙酮沉降法和Tris-平衡酚抽提法进行叶绿体蛋白质的提取。最后用单向电泳（SDS-PAGE）和双向电泳（2-DE）分析两种方法叶绿体蛋白质的产量以及在双向电泳中的蛋白质点数量。【结果】通过透射电镜观察，提取的叶绿体平均完整率在85%左右，叶绿体的分离和纯化质量较高，使得降低了样品的复杂性降低，提高了蛋白质的富集。然后与TCA-丙酮沉淀法相比，采用Tris-平衡酚抽提法提取的银杏叶绿体蛋白质，提取效率更高，蛋白质质量更好，更适于双向电泳分析，且提取过程比普通酚抽法更为简便，有利于减少蛋白降解。【结论】初步建立了适于双向电泳分析的银杏叶片以及富含杂质的木本植物叶片的叶绿体蛋白质提取的方法体系。

关键词：银杏叶绿体蛋白质提取电泳

For information in English, please click here

The Extraction Method of Chloroplast Protein from Ginkgo biloba L. which is suitable for the Analysis of two-dimensional electrophoresis

Liang Feifei ¹
梁霏霏（1994-），女，本科生，生物与环境学院，生物科学专业。
Shi Dawei ¹
施大伟，博士，讲师，主要从事植物生理与细胞生物学研究
He Mei ¹ Xu Ming ¹

1、College of Life and Enviroment,Nanjing Forest University,Nanjing 210037

Abstract：【Object】The experiments were aimed at developing the measurement of chloroplast protein efficient extraction and separation from ligneous plants such as ginkgo.【Method】Referred to the method with which came up by Pflieger and Rossier and improved that in order to separate the chloroplast with more efficiently.Otherwise,use the transmission electron microscope to observe and measure the percentage of the complete one in all the chloroplast.Two groups complete chloroplast were extract from 10g ginkgo leaves respectively,with the former one used TCA-acetone precipitation method while the latter one adopt Tris-balance of phenol extraction method to extract chloroplast protein.Established from the extracted protein above,then,analyzed the production in the two extraction methods by SDS-PAGE electrophoresis and dimensional electrophoresis(2-DE).And compared the protein spots number in dimensional electrophoresis(2-DE) by the two extracted methods.【Result】Observing from the transmission electron microscope the completion percentage of the extracted chloroplast was about 85%.The quality of the chloroplast separating and purifying was superior which decrease the complexity of specimen while increase the enrichment of protein.Compared with TCA-acetone precipitation method,the Tris-phenol extraction method has a higher extraction efficiency,which has a more convenient progress than normal phenol method and was beneficial to protein degradation.Also the extracted protein have a better quality and dimensional electrophoresis analyses was more suitable to do.【Conclusion】The experiments initially established the chloroplast protein extraction system that suit the ginkgo leaves and impurity enriched ligneous plants which analyzed by the dimensional electrophoresis.)

Keywords： Ginkgo；chloroplast protein extraction electrophoresis

基金：

1. 江苏省大学生实践创新训练计划项目（201410298089X）

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梁霏霏，施大伟，何梅，等. 适于双向电泳分析的银杏叶绿体蛋白质提取方法[EB/OL]. 北京：中国科技论文在线 [2016-01-12]. https://www.paper.edu.cn/releasepaper/content/201601-270.

No.4673868112751814****

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论文编号	201601-270
论文题目	适于双向电泳分析的银杏叶绿体蛋白质提取方法
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